準(zhǔn)備F12培養(yǎng)基；添加ITS（10ug/mL胰島素；轉(zhuǎn)鐵蛋白5.5ug/mL;5ng/mL硒）1%，EGF5ng/mL，優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。1）收貨前根據(jù)說(shuō)明書(shū)培養(yǎng)條件，提前準(zhǔn)備細(xì)胞培養(yǎng)所需材料。
2）收到細(xì)胞后，請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
3）收貨后沒(méi)有外觀損壞的情況下用75%酒精消毒后將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h等待細(xì)胞穩(wěn)定。
4）細(xì)胞穩(wěn)定后在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，判斷細(xì)胞的密度并清晰拍照200倍400倍照片最少2張記錄反饋細(xì)胞狀態(tài)以防出現(xiàn)售后作為證據(jù)，沒(méi)有照片和反饋默認(rèn)接受細(xì)胞質(zhì)量沒(méi)有問(wèn)題。

備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)密度達(dá)到80%左右，?傳代比例前幾次都按照1:2傳代，傳代后一個(gè)倍增周期后可以長(zhǎng)成2瓶80%左右密度的細(xì)胞時(shí)，凍存其中一瓶成1個(gè)1ml的凍存管當(dāng)種子細(xì)胞保存，另外一份長(zhǎng)滿(mǎn)的細(xì)胞繼續(xù)1:2傳代，反復(fù)操作后凍存細(xì)胞種子大約3個(gè)以上。后續(xù)根據(jù)細(xì)胞倍增效率和密度可以適當(dāng)擴(kuò)大傳代比例做實(shí)驗(yàn)。

傳代比例：
1個(gè)T25瓶傳2個(gè)6cm的培養(yǎng)皿或者2個(gè)T25瓶相當(dāng)于1:2
1個(gè)T25瓶傳1個(gè)10cm的培養(yǎng)皿或者1個(gè)T75瓶相當(dāng)于1:3